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Issue Date: 13-Mar-2012
Authors: Costa, Chiara
Title: L'espressione di fosfolipasi A2 Ca2+-dipendenti e Ca2+-indipendenti e le ciclossigenasi in melanociti umani e colture cellulari di melanoma maligno.
Abstract: In questa tesi forniamo nuove prove che le colture cellulari di melanoma umano (M10, M14, SK-MEL28, SK-MEL93, 243MEL, 1074MEL, OCM-1, and COLO38) esprimono, ai livelli di proteina e mRNA, o fosfolipasi A2 (1PLA2) Ca2+ indipendente ) oppure fosfolipasi citosolica A2 (cPLA2) ) e la sua forma fosforilata. I melanociti umani normali contengono i livelli più bassi di ambedue le PLA2. Sono state espresse pure ciclossigenasi 1 e 2 (COX-1 e COX-2) nelle colture cellulari com'è dimostrato dai Western blot. La più notevole espressione genica di iPLA2 e COX-1 è stata trovata in due cellule derivate dal melanoma, M14 e COLO38. I melanociti umani normali e la coltura cellulare melanotica M10 non hanno dimostrato nessuna espressione COX-2. Utilizzando il frazionamento subcellulare, il Western blot e le analisi di microscopio confocale nelle cellule paradigmatiche SK-MEL28 e SK-MEL93, abbiamo dimostrato che iPLA2, COX-1 ed anche cPLA2, sono ugualmente localizzate nel citosol, le strutture membraniformi e le regioni nucleari mentre COX-2 è stata associata in modo preferenziale con il citosol. Gli inibitori selettivi di questi tre enzimi hanno ridotto significativamente il tasso di proliferazione basale nei melanociti o nelle colture cellulari melanocitiche. Questi risultati, associati con l'inibizione della proliferazione cellulare per l'elettroporazione di cellule melanotiche con cPLA2 o anticorpi di COX-2, dimostrano che esiste una possibile correlazione fra l'espressione PLA2-COX e la proliferazione di colture cellulari nel sistema melanocitico. Inoltre, l'alto livello dell'espressione delle PLA2 e COX suggerisce che gli eicosanoidi modulano la proliferazione cellulare e le attività invasive del tumore.
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